Hoe spectrofotometrische analyse uit te geven

Spectrofotometrie - een experimentele methode waarmee u de concentratie van opgeloste stoffen met de hoeveelheid licht geabsorbeerd kunt meten. De hoge efficiëntie van deze methode is te wijten aan het feit dat verschillende verbindingen anders worden geabsorbeerd door licht met een bepaalde golflengte. In de hoeveelheid doorgang van het licht kan worden ontdekt welke verbindingen in de oplossing aanwezig zijn en hun concentraties bepalen. In de laboratoria wordt hiervoor een speciaal apparaat gebruikt - spectrofotometer.

Stappen

Deel 1 van 3:
Voorbereiding van monsters
  1. Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 1
een. Schakel spectrofotometer in. De meeste spectrofotometers hebben een voorlopige verwarming nodig - het helpt bij het krijgen van nauwkeurigere resultaten. Schakel het apparaat in en wacht minstens 15 minuten voordat u verder gaat met metingen.
  • Gebruik de warmingstijd om de monsters voor te bereiden.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 2
    2. Was de cuvettes en reageerbuizen. Bij het uitvoeren van laboratoriumwerk op school kunt u een wegwerpbare reageerbuizen geven die niet hoeven te worden schoongemaakt. Als u herbruikbare cuvettes of reageerbuizen gebruikt, moeten ze vóór het werk worden gespoeld. Was grondig alle gerechten door gedeïoniseerd water.
  • Let op voorzichtig bij het hanteren van cuvetten, omdat ze vrij duur kunnen zijn.
  • Raak uw handen niet aan op die plaatsen aan de muur van de cuvette, waardoor het licht zal passeren (meestal transparante zijden).
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 3
    3. Vul een cuvette in de vereiste hoeveelheid fluïdum onder het onderzoek. Het maximale volume van sommige cuvette is 1 milliliter (ML), terwijl reageerbuizen kunnen worden berekend met 5 milliliter. Om nauwkeurige resultaten te verkrijgen, is het noodzakelijk dat de laserstraal door de vloeistof passeert en het lege deel van de tank niet pijn heeft gedaan.
  • Als u de onderwijzingsfluïdum gebruikt met behulp van een pipet, gebruikt u een nieuwe pipet voor elke oplossing om kruisbesmetting van monsters te voorkomen.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 4
    4. Maak een controle-oplossing voor. Controle of inactieve oplossing is een puur oplosmiddel, zonder onzuiverheden aanwezig in andere monsters. Als u bijvoorbeeld zout in water oplost, moet deze als een enkele oplossing worden geplaatst. Als u in het rood gekleurd water hebt, is het ook noodzakelijk om rood water als stationair aan te nemen. De idle-oplossing moet hetzelfde volume hebben als de bestudeerde oplossingen, en het zou in dezelfde container moeten gieten.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 5
    vijf. Veeg het buitenoppervlak van de cuvette af. Voordat u een cuvette in een spectrofotometer plaatst, is het noodzakelijk om ervoor te zorgen dat het schoon is, anders kunnen de vuildeeltjes en stof de resultaten vervormen. Veeg een pluisvrije doek een cuvettale muur buiten om mogelijke waterdruppels en stofdeeltjes te verwijderen.
    • Deel 2 van 3:
    Experiment
    1. Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 6
    een. Selecteer en stel de golflengte van het licht in om de monsters te analyseren. Gebruik voor meer nauwkeurigheid het licht met één golflengte (monochromatisch licht). Het is noodzakelijk om een ​​dergelijke golflengte te kiezen, zodat het licht wordt geabsorbeerd door een van de verbindingen, die zou moeten deelnemen aan de onderzoekende oplossing. Stuur de geselecteerde golflengte op de spectrofotometer in overeenstemming met de instructies voor instrumentbewerking.
    • Met laboratoriumklassen kan de golflengte van het licht een leraar vragen.
    • Omdat het monster al het licht weerspiegelt uit de golflengte die overeenkomt met de kleur van deze oplossing, moet het experiment licht gebruiken op de andere golflengte.
    • Objecten hebben een of andere kleur vanwege het feit dat ze het licht weerspiegelen met de overeenkomstige golflengte en het absorberen van straling met andere golflengten. Gras groen door het feit dat het chlorofyl bevat, die het groene licht weerspiegelt en licht absorbeert met andere golflengten.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 7
    2. Kalibreer het apparaat bij inactief. Plaats in de houder van de spectrofotometercuvette met inactief en sluit het deksel van de apparaat. Analoge spectrofotometers zijn uitgerust met een pijlschaal, de hoek van de afwijking ervan wordt bepaald door de intensiteit van het laatste licht. In het geval van inactieve oplossing, zal de pijl rechts afwijzen. Noteer de meetwaarden van het instrument in het geval ze u later nodig hebben. Verplaats vervolgens de pijl naar de nulpositie met behulp van de aanpassingsknop (terwijl de inactieve oplossing nog steeds in het apparaat moet blijven).
  • Digitale spectrofotometers in plaats van de schaal zijn uitgerust met een display en kunnen op dezelfde manier worden gekalibreerd. Stel nul in voor stationair draaien met de instellingsknoppen.
  • Kalibratie zal doorgaan nadat u de inactieve oplossing hebt ontvangen. Bij het werken met de rest van de monsters wordt het licht dat wordt geabsorbeerd door het niet-afgelegen oplosmiddel automatisch worden afgetrokken van de meetwaarden van het instrument.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 8
    3. Krijg een slapende met inactief en controleer de kalibratie. Bij afwezigheid van stationair draaien moet de pijl op het niveau van nul blijven (nul moet worden bewaard op het display). Registreer om een ​​oplossing in het apparaat te plaatsen en zorg ervoor dat de spectrofotometer nog steeds nul vertoont. Met een goede kalibratie moet het apparaat nul en met inactieve oplossing tonen, en zonder.
  • In het geval van niet-zero-instrumentwaarden herhaalt u de kalibratie met een enkele oplossing.
  • Vraag in het geval van verdere problemen om hulp te vragen of verwijs naar het servicevaartje op technisch personeel.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 9
    4. Meet de optische dichtheid van het experimentele monster. Ga uit het apparaat inactieve oplossing en plaats het monster erin. Wacht ongeveer 10 minuten tot de pijl kalmeert of totdat de cijfers niet zullen stoppen met wijzigen. Noteer daarna de waarde van de transmissie- en / of optische dichtheidswaarde.
  • Hoe meer licht door het monster gaat, hoe minder het licht absorbeert. Geef typisch optische dichtheidswaarden op die een vorm van decimale fractie hebben, bijvoorbeeld 0,43.
  • Herhaal de metingen voor elk monster minstens drie keer en vind de gemiddelde waarden. U krijgt dus nauwkeurige resultaten.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 10
    vijf. Herhaal het experiment voor andere golflengten. Het monster kan verschillende onbekende onzuiverheden bevatten die licht absorberen met verschillende golflengte. Om onzekerheid te elimineren, herhaalt u de meting in 25 nanometers in het hele spectrum. Hiermee kunt u andere verbindingen definiëren die deel uitmaken van de oplossing die wordt bestudeerd.
    • Deel 3 van 3:
    Analyse van de verkregen gegevens
    1. Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 11
    een. Bereken de transmissiecoëfficiënt en optische monsterdichtheid. De bandbreedte laat zien hoe het aandeel van het licht door het monster is geleid en een spectrofotometereldetector bereikt. Optische dichtheid laat zien hoeveel licht een van de verbindingen opgelost in vloeistof wordt geabsorbeerd. Veel moderne spectrofotometers geven onmiddellijk de waarden van de verhouding van de transmissie en de optische dichtheid, maar als u de intensiteitswaarden hebt opgenomen, kunt u deze waarden zelf berekenen.
    • De transmissiecoëfficiënt (t) is door de intensiteit van het licht door het lichtsteam op de intensiteit van het licht te delen, dat door de inactieve oplossing is gegaan. In de regel wordt deze coëfficiënt geschreven in de vorm van een decimale fractie of percentage. T = I / I0, waar ik de intensiteit van het licht is dat het bestudeerde monster is doorgegeven, ik0 - de intensiteit van het licht dat is verstreken door inactieve oplossing.
    • Optische dichtheid (A) is gelijk aan een logaritme voor een basis van 10 van de transmissiecoëfficiënt die is genomen met een negatief teken: A = -LOG10T. Als t 0,1 is, is een 1 (0,1 gelijk aan 10 tot graad -1), dat wil zeggen, 10 procent van de lichtpassen en 90 procent wordt geabsorbeerd. Bij T = 0,01 is de optische dichtheid A 2 (0,01 is 10 tot graad -2), dat wil zeggen, slechts 1 procent van de lichtpassen.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 12
    2. Bouw de afhankelijkheid van de optische dichtheid van de golflengte. Zet de optische dichtheid op de verticale as OY, en op de horizontale as van OS, markeer de gebruikte golflengten. Optische dichtheidspieken voor elke gebruikte golflengte zijn het absorptiespectrum van dit monster, dat kan worden bepaald welke stoffen en in welke verhoudingen in dit monster worden opgelost.
  • Het absorptiespectrum heeft meestal Maxima bij bepaalde golflengten, volgens welke u de resulterende substantie kunt bepalen.
  • Titel afbeelding Do spectrofotometrische analyse Stap 13
    3. Vergelijk het resulterende absorptiespectrum met bekende absorptiespectra voor verschillende stoffen. Elke verbinding heeft een karakteristiek absorptiespectrum, het geeft altijd piek op dezelfde golflengte. Vergelijk het spectrum van een onbekende oplossing met bekende spectra van verschillende stoffen en bepaal welke verbindingen in uw oplossing zijn opgenomen.
  • Met deze methode kunt u ook de contaminatie van het monster identificeren. Als u verwacht een duidelijke piek bij een bepaalde golflengte te ontvangen, en in plaats daarvan detecteert u twee afzonderlijke piek, betekent dit dat er iets mis is met uw monster.

    • Wat je nodig hebt

    • Spectrofotometer
    • Oplossing voor onderzoek
    • Schoon oplosmiddel (voor besturingsoplossing)
    • Capaciteiten voor de bestudeerde en controle-oplossingen (cuvette, reageerbuizen en dergelijke)
    Deel in het sociale netwerk:
    Vergelijkbaar